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全书包括五部分内容，分别为酶学基础实验、微生物发酵产酶实验、酶的提取与分离纯化实验、酶的固定化及分子修饰实验以及酶的应用实验。基本涵盖酶工程领域的基础实验内容。本书可作为生物技术、生物工程、食品生物技术、生物制药等专业学生的参考用书，也可供相关行业的技术人员参考。

第一部分 酶学基础实验1

实验一 酶促反应中初速度时间范围测定 1

实验二 pH对酶活力的影响——最适pH的测定 5

实验三 温度对酶活力的影响——最适温度的测定 8

实验四 米氏常数和反应速率的测定 11

实验五 抑制条件下Km和vmax的测定及抑制类型的判定 15

第二部分 微生物发酵产酶实验 20

实验六 产淀粉酶菌株的快速筛选 20

实验七 碱性蛋白酶高产菌株的选育 24

第三部分 酶的提取与分离纯化实验 28

实验八 酵母中蔗糖酶的提取及酶活测定 28

实验九 α-淀粉酶的提取及活力测定 32

实验十 酸性磷酸酯酶的提取和酶活力测定 36

实验十一 溶菌酶的制备及活力测定 40

实验十二 大蒜细胞SOD的提取和分离 43

实验十三 离子交换色谱法分离蛋白 46

实验十四 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 50

第四部分 酶的固定化及分子修饰实验 57

实验十五 蔗糖酶包埋及固定化酶活测定 57

实验十六 尼龙固定化木瓜蛋白酶 60

实验十七 酵母细胞固定化 63

实验十八 胆绿素还原酶的修饰与活性基团的鉴定 66

第五部分 酶的应用实验 69

实验十九 淀粉的糖化及DE值的测定 69

实验二十 酶法澄清苹果汁加工工艺优化 74

实验二十一 酶反应器设计及酪蛋白水解物的制备 76

实验二十二 酶试纸法检测样品中H2O2的浓度 79

实验二十三 邻苯二酚双加氧酶基因在大肠杆菌中的表达 82

参考文献 86

附录 88

王君，滨州学院生物工程学院，副院长，2008年获得南开大学微生物学专业博士学位后，就职于滨州学院生物工程学院、山东省黄河三角洲生态环境重点实验室，主要研究方向为资源细菌及其工程学，在环境中微生物的多样性调查、功能微生物菌种选育、驯化及应用方面取得了多项研究成果。主持完成国家自然科学基金项目1项，山东省自然科学基金项目1项，山东省高等学校科技计划项目1项，山东省科技发展计划项目1项，滨州学院博士基金及重大研究课题各1项，与企业合作研发项目4项。发表文章SCI、EI及核心期刊文章20多篇，已获得国家发明专利4项。主讲《酶工程》、《酶工程实验》，积极参与该课程的教学改革中，通过完成校级重点教研课题，搭建开放实验室教学平台，深化酶工程实验教学改革；立项《酶工程实验指导》教材编写项目。近五年，指导本科毕业论文38人次，2次获得省级优 秀学士学位论文指导教师称号。

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前言

生物技术已成为发展最快、应用最广、潜力、竞争最为激烈的科技领域之一，也是最有希望取得关键性突破的学科之一。生物技术产业作为一个正在崛起的主导性产业，已成为产业结构调整的战略重点和新的经济增长点，将成为我国赶超世界发达国家生产力水平、实现后发优势和跨越式发展最有前途、最有希望的领域。酶工程是生物技术的四大重要组成部分之一，是酶学和工程学相互渗透、相互结合发展而形成的一门新的技术科学，是酶学、微生物学的基本原理与化学工程等有机结合而产生的交叉学科。酶作为生物催化剂具有催化专一性好、效率高、作用条件温和等优点，已广泛应用于医药、食品、轻工、化工、能源、环保、检测、生物技术等领域，深刻影响着许多重要的科学和实践领域。《酶工程实验指导》与《酶工程》教材内容紧密结合，旨在通过实验强化学生对课堂内容的理解和掌握。结合作者学校院系实验条件，《酶工程实验指导》选择了二十三个实验，主要集中在酶及酶工程概论、微生物发酵产酶、酶的提取和分离纯化、酶活力测定、酶的固定化和酶的分子修饰等内容，基本上反映了教材内容。在本书编写过程中，我们参考了许多国内外相关的教材和文献资料，借鉴了一些重要的实验案例，在此向各位前辈和同行致以衷心的感谢。本教材还得到了学校、出版社的大力支持和帮助，谨在此一并表示衷心的感谢。限于编者的水平有限，加之时间仓促，书中不足之处在所难免，敬请专家和同行以及广大读者给予批评指正。编者二〇一八年一月